- ID
-
ocds-pyfy63:2017-102323:obj:1
- Classification
-
CPV /
73111000
- Description
-
A szolgáltatás célja immortalizált csirke/emlős sejtvonalakban nagy mennyiségben megtermelt fehérjék natív térszerkezetének kialakításához szükséges megemelt mennyiségű, aktivitású és specifikus összetételű dajkafehérje készlet optimalizálása, mely a termelendő fehérjék stabilitását, mennyiségét és funkcionalitását fokozza. A dajkafehérjék expressziójának és működésének indukálása/modulálása nem proteotoxikus kismolekulák sejtkultúrába juttatásával a stressz-jel képző és jelátviteli folyamatok célzott aktiválásával.
A feladatok részletes tartalma:
1. Sejtvonalak növekedésének és stabilitásának fokozása fermentorban történő növesztéshez.
1.1. A dajkafehérjék expressziójának és működésének a megbízó által rendelkezésre bocsátott csirke/emlős sejtvonalon történő jellemzése.
A hőkezelés hatásának meghatározása a fő dajkafehérje osztályok (Hsp90, Hsp70, HSP60, HSP27) mennyiségére a különböző sejtvonalakon.
1.2. Az 1.1 részfeladat során jellemzett csirke/emlős sejtvonalakon a dajkafehérje szint nem specifikus (kémiai induktorokkal) ill. specifikus modulációja ko-induktor kismolekulákkal, stressz-jel képző és jelátviteli folyamatok célzott aktiválásával.
Az 1.1 részfeladathoz hasonlóan tenyésztett sejtek specifikus HSP ko-indoktor kismolekulákkal történő kezelésének optimalizálása az 1.1 részfeladatban beállított dajkafehérje profil követésének segítségével az ideális dajkafehérjeszerkezet eléréséhez.
1.3. A tenyésztési körülmények optimalizásálása a 1.2. részfeladat során kiválasztott stresszfehérje szintet módosító kezeléshez.
A tenyésztési körülmények (szérum, médium, hőmérséklet, stb.) optimalizálása az 1.2 feladat során optimalizált dajkafehérje szintet módosító kezeléshez a sejtvonalak növekedésének és stabilitásának fokozása érdekében fermentorban történő növesztéshez.
2. Fehérjetermelés mennyiségének és minőségének optimalizásása.
2.1. A megbízó által rendelkezésre bocsátott fehérjetermelő csirke/emlős sejtvonalakban a fehérje termelését/ stabilitását, mennyiségét és funkcionalitását optimalizáló dajkafehérje moduláció tervezése és megvalósítása az 1. részfeladat eredményei alapján.
A sejtek stabilitásának követése az 1. részfeladatban részletezett technikákkal ill. a termelt fehérje tisztítását követő mikrokalorimetriás (DSC) ill spekroszkópiai (CD) vizsgálatokkal. A termelt fehérje minőségi analíziséhez folyadékkromatográfiás (HPLC) módszer fejlesztése a termelt fehérje méretére ill töltésére optimalizált kromatográfiás lépésekkel. A tisztított fehérje tisztaságának SDS gélelektroforézissel történő ellenőrzése. A termelt fehérje szerkezeti vizsgálata kalorimetriával és cirkuláris dikroizmus mérésekkel. Az 1. részfeladatban kidolgozott dajkafehérje profilt módosító kezelés fehérjetermelésre történő optimalizációja, annak a chaperon szerkezetnek a kiválasztására mely egyidőben a lehető legmagasabb fehérje kitermelést segíti elő miközben a termelt fehérje szerkezete megőrzi funkcionalitását.
2.2. A tenyésztési körülmények optimalizásálása a 2.1 részfeladat során kiválasztott stresszfehérje szintet módosító kezeléshez.
A tenyésztési körülmények (szérum, médium, hőmérséklet, stb.) fermentorban történő növesztéshez való optimalizálása a 2.1 pontban beállított fehérjetermelést biztosító dajkafehérje szintet módosító kezeléssel a sejtvonalak növekedésének és stabilitásának fokozása érdekében.